本教材參照我國農業(yè)人才培養(yǎng)目標和教學要求,設置了核酸提取和檢測,蛋白質提取、純化和檢測,目的基因的檢測及其表達分析,重組質粒的構建及其遺傳轉化,分子雜交和互作相關技術五部分內容,包括25個目前常用的分子生物學實驗。這些實驗技術比較符合當前農學學科特點和農業(yè)科研機構的需求。每個實驗都包括背景知識、實驗原理、實驗目的、實驗材料、試劑與儀器、實驗步驟及其解析、實驗結果與報告、思考題、研究案例、附錄、拓展知識和參考文獻等內容。附錄主要介紹實驗室常用溶液和培養(yǎng)基的配制過程,以期為學生和實驗員提供方便和較為全面的參考資料。
本教材內容適當,編排合理,專業(yè)適用面寬,適用于農學、植物保護、園藝、種子科學與工程、草業(yè)科學和生物技術等農業(yè)科學專業(yè)的本科生分子生物學實驗教學和初進實驗室研究生的實驗參考。
部分 核酸的提取和檢測
實驗一 植物基因組DNA提取及其檢測
實驗二 細菌質粒DNA的提取和電泳檢測
實驗三 植物總RNA提取及其檢測
實驗四 植物小RNA的提取
第二部分 蛋白質提取、純化和檢測
實驗五 重組蛋白的提取和純化
實驗六 植物總蛋白的提取和電泳檢測
實驗七 小麥葉片蛋白雙向電泳分析
實驗八 Western印跡法
第三部分 目的基因的檢測及其表達分析
實驗九 PCR擴增目的基因片段
實驗十 分子標記的開發(fā)和應用
實驗十一 半定量RT-PCR技術的原理及應用
實驗十二 實時熒光定量PCR
實驗十三 基因表達部位的原位雜交檢測
實驗十四 亞細胞定位實驗
第四部分 重組質粒的構建及其遺傳轉化
實驗十五 DNA片段的回收和連接
實驗十六 重組子的轉化和藍白斑篩選
實驗十七 重組質粒的酶切驗證
實驗十八 農桿菌蘸花法轉化擬南芥
實驗十九 根瘤農桿菌介導的玉米遺傳轉化
實驗二十 小麥基因槍轉化(瞬時表達)
第五部分 分子雜交和互作相關按術
實驗二十一 利用酵母雙雜交技術篩選靶蛋白的互作蛋白
實驗二十二 融合蛋白沉降技術分析蛋白質的相互作用
實驗二十三 酵母單雜交系統及其應用
實驗二十四 電泳遷移率實驗檢測蛋白質-DNA結合相互作用
實驗二十五 染色質免疫共沉淀