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　　分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第二版）分三部分，共13章：第一部分分為4章，介紹分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)，包括實(shí)驗(yàn)室規(guī)則、實(shí)驗(yàn)室安全知識(shí)、常用儀器及其使用、常用培養(yǎng)基和抗生素溶液的配制，以及GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)；第二部分介紹分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)，從第5章到第10章，含11個(gè)實(shí)驗(yàn)，分別介紹質(zhì)粒的提取、酶切、電泳、轉(zhuǎn)化、重組及鑒定、PCR技術(shù)、核酸雜交技術(shù)、外源基因的表達(dá)及分離純化技術(shù)；第三部分為分子生物學(xué)綜合性、研究性實(shí)驗(yàn)，從第11章到第13章，含 6個(gè)實(shí)驗(yàn)�！　� 本書(shū)可供生物類(lèi)、農(nóng)學(xué)類(lèi)、食品類(lèi)、藥學(xué)類(lèi)等專(zhuān)業(yè)的本科院校師生，科研院所科研人員和企事業(yè)單位技術(shù)人員等使用

隨著分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的迅速發(fā)展，生命科學(xué)在理論與應(yīng)用上都取得了驚人的進(jìn)展。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)逐漸系統(tǒng)化，現(xiàn)已成為生命學(xué)科各領(lǐng)域研究的常規(guī)技術(shù)。在十幾所本科院校和華中科技大學(xué)出版社的大力支持和幫助下，我們編寫(xiě)了這本《分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》。為適應(yīng)創(chuàng)新人才培養(yǎng)要求，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)教學(xué)中進(jìn)行了大量的改革，并體現(xiàn)在教材中。本教材第一版出版后，被全國(guó)多所高校選為實(shí)驗(yàn)教材，得到任課教師和讀者的好評(píng)。同時(shí)，對(duì)不足之處也提出了很多寶貴意見(jiàn)。在第一版的基礎(chǔ)上，我們對(duì)部分內(nèi)容進(jìn)行了更新和完善，并新增了一些實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。本教材分三部分，共13章：第一部分分為4章，介紹分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)，包括實(shí)驗(yàn)室規(guī)則、實(shí)驗(yàn)室安全知識(shí)、常用儀器及其使用、常用培養(yǎng)基和抗生素溶液的配制，以及GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)；第二部分介紹分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)，從第5章到第10章，含13個(gè)實(shí)驗(yàn)，分別介紹質(zhì)粒DNA的提取、酶切、電泳、轉(zhuǎn)化、重組及鑒定、PCR技術(shù)、核酸雜交技術(shù)、外源基因的表達(dá)及分離純化技術(shù)；第三部分為分子生物學(xué)綜合性、研究性實(shí)驗(yàn)，從第11章到第13章，含6個(gè)實(shí)驗(yàn)。本教材部分實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的設(shè)置體現(xiàn)了編者所在高校開(kāi)設(shè)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)特色。通過(guò)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)培養(yǎng)學(xué)生在分子生物學(xué)方面的基本技術(shù)和技能，通過(guò)學(xué)生的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)踐，培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新思維和獨(dú)立分析問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力。參加本次教材編寫(xiě)的有：湖南文理學(xué)院的李峰、李榮、張運(yùn)生、郝小花，北京理工大學(xué)陳姿喧，大連海洋大學(xué)王秀利，哈爾濱工業(yè)大學(xué)劉川鵬、寧夏大學(xué)羅仍卓么、王興平，長(zhǎng)治學(xué)院雷海英，宿州學(xué)院馮凡，遼寧大學(xué)楊哲，塔里木大學(xué)王有武，山西農(nóng)業(yè)大學(xué)段永紅。另外，淮陰工學(xué)院賈建波、孫金鳳，唐山師范學(xué)院范永山、張運(yùn)峰，北京理工大學(xué)馬宏，河南科技大學(xué)侯典云，重慶郵電大學(xué)何曉紅，陜西科技大學(xué)李紅心，嘉興學(xué)院朱長(zhǎng)俊參與了第一版的編寫(xiě)工作，在此表示衷心的感謝。本教材可供生物類(lèi)、農(nóng)學(xué)類(lèi)、食品類(lèi)、藥學(xué)類(lèi)等專(zhuān)業(yè)的本科院校師生，科研院所科研人員和企事業(yè)單位技術(shù)人員等使用，也可供其他相關(guān)專(zhuān)業(yè)的學(xué)生選修或自學(xué)時(shí)參考。第二版教材雖然經(jīng)編者認(rèn)真勘校，還是會(huì)存在某些不妥之處，敬請(qǐng)同行及廣大讀者批評(píng)指正。

第一部分分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)

第1章分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則和安全/2

1.1實(shí)驗(yàn)室一般規(guī)則/2

1.2實(shí)驗(yàn)室常識(shí)/2

1.3實(shí)驗(yàn)室安全基礎(chǔ)知識(shí)/3

1.4實(shí)驗(yàn)室合理設(shè)計(jì)和布局/4

1.5實(shí)驗(yàn)室急救/4

1.6廢棄物、放射性物質(zhì)及有毒物質(zhì)的處理/5

第2章分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器設(shè)備及其操作/7

2.1分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器設(shè)備/7

2.2冷凍離心機(jī)/8

2.3電泳儀/9

2.4分析天平/10

2.5分光光度計(jì)/10

2.6數(shù)字式酸度計(jì)/11

2.7普通PCR儀/12

2.8實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀/13

2.9凝膠成像系統(tǒng)/14

2.10多功能微孔板酶標(biāo)儀/15

2.11搖床/16

2.12水的凈化裝置/16

2.13消毒設(shè)備/17

第3章細(xì)菌培養(yǎng)常用培養(yǎng)基和抗生素溶液的配制方法/19

3.1常用培養(yǎng)基的配制方法/19

3.2常用抗生素溶液的配制方法/20

第4章GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)簡(jiǎn)介/22

4.1概述/22

4.2GenBank的建立與發(fā)展/23

4.3GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)構(gòu)/25

4.4基因基本信息檢索/29

4.5GeneBank在分子生物學(xué)中的應(yīng)用/30

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)夸浀诙糠址肿由飳W(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)

第5章核酸的制備/36

5.1核酸制備的原理與方法/36

5.2質(zhì)粒的生物學(xué)特性/39

5.3常用克隆載體的特征/41

實(shí)驗(yàn)1真核生物基因組DNA提取/42

實(shí)驗(yàn)2總RNA的提取及鑒定/44

實(shí)驗(yàn)3質(zhì)粒DNA的微量提取和鑒定/48

第6章DNA的酶切和凝膠電泳/51

6.1限制性核酸內(nèi)切酶的特性及應(yīng)用/51

6.2瓊脂糖凝膠電泳/53

6.3聚丙烯酰胺凝膠電泳/55

實(shí)驗(yàn)4DNA的限制性核酸內(nèi)切酶酶切及凝膠電泳/57

第7章DNA轉(zhuǎn)化/61

7.1感受態(tài)細(xì)胞的制備/61

7.2轉(zhuǎn)化/61

實(shí)驗(yàn)5大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化/63

第8章DNA重組的基本流程和方法/68

8.1目的基因的獲取/68

8.2DNA分子的體外重組/69

8.3DNA重組體的導(dǎo)入/70

8.4受體細(xì)胞的篩選/72

8.5基因表達(dá)/73

實(shí)驗(yàn)6DNA片段的黏性末端連接法/74

實(shí)驗(yàn)7DNA片段的黏平端連接法/75

實(shí)驗(yàn)8重組子的篩選與鑒定/77

第9章聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)/80

9.1常規(guī)PCR技術(shù)的原理及操作/80

9.2引物設(shè)計(jì)原則及合成/84

9.3PCR產(chǎn)物的純化與鑒定/85

9.4PCR技術(shù)的延伸及應(yīng)用/87

實(shí)驗(yàn)9PCR擴(kuò)增特異性DNA片段及擴(kuò)增產(chǎn)物的純化與鑒定/91

實(shí)驗(yàn)10實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)基因的表達(dá)量/93

第10章核酸雜交技術(shù)/98

10.1幾種核酸探針標(biāo)記方法/98

10.2核酸探針制備和純化技術(shù)/101

實(shí)驗(yàn)11核酸探針制備和純化/109

實(shí)驗(yàn)12菌落原位雜交法/112

實(shí)驗(yàn)13miRNA原位雜交/114

第三部分分子生物學(xué)綜合性、研究性實(shí)驗(yàn)

第11章外源基因的表達(dá)/118

11.1外源基因在原核生物中的表達(dá)/118

11.2外源基因在酵母細(xì)胞中的表達(dá)/125

實(shí)驗(yàn)14外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)/130

實(shí)驗(yàn)15SDSPAGE電泳檢測(cè)表達(dá)的外源蛋白/131

實(shí)驗(yàn)16脂肪酶基因在枯草桿菌中表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的研究/133

實(shí)驗(yàn)17外源基因在酵母細(xì)胞中表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的研究/135

第12章利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行細(xì)菌的種屬鑒定/137

12.1微生物分類(lèi)鑒定方法的發(fā)展/137

12.216S rDNA分類(lèi)鑒定技術(shù)的原理/138

實(shí)驗(yàn)18利用16S rDNA序列分析技術(shù)進(jìn)行細(xì)菌種屬的鑒定/139

第13章基因表達(dá)差異的分析/144

13.1差減雜交/144

13.2mRNA差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR/145

13.3cDNA代表性差異分析/145

13.4差減抑制消減雜交方法/146

實(shí)驗(yàn)19半定量RTPCR技術(shù)檢測(cè)基因的表達(dá)差異/147

附錄/152

附錄A常用單位及換算方法/152

附錄B常用核酸、蛋白質(zhì)換算數(shù)據(jù)/152

附錄C核酸的單位及有關(guān)數(shù)據(jù)/153

附錄D常見(jiàn)核酸分子的長(zhǎng)度和相對(duì)分子質(zhì)量/153

附錄E色素在聚丙烯酰胺凝膠中的移動(dòng)參數(shù)/154

參考文獻(xiàn)/155

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