本教材是為生物工程及相關(guān)專業(yè)學(xué)生編寫的專業(yè)實驗教材,根據(jù)生物工程專業(yè)實驗要求,詳細(xì)敘述了實驗的目的要求、基本原理、具體操作步驟,羅列了每個實驗的所需材料和儀器設(shè)備,并對實驗中應(yīng)注意的地方給予了提示,每個實驗均有對該實驗結(jié)果的認(rèn)真記錄考核要求,在每個實驗后附有一定的實驗思考題,并且還有實驗指導(dǎo)視頻供學(xué)生下載觀看,以幫助學(xué)生加深對該實驗的理解和掌握;同時,本書還加入二十大等思政內(nèi)容,培養(yǎng)學(xué)生成為德才兼?zhèn)涞膽?yīng)用型人才。
吳元鋒博士、教授、博士生導(dǎo)師,畢業(yè)于浙江大學(xué),美國伊利諾伊大學(xué)厄巴納-香檳分校訪問學(xué)者。擔(dān)任浙江科技大學(xué)生物與化學(xué)工程學(xué)院副院長,兼任浙江省食品學(xué)會青年工作委員會副主任委員、浙江省微生物學(xué)會理事等。主要從事植物天然產(chǎn)物提取、生物轉(zhuǎn)化及活性
方面的研究。承擔(dān)“生物工程專業(yè)實驗”“分子生物學(xué)與基因工程”等課程的教學(xué)工作。主持國家和省級項目9項;牽頭獲得浙江省科學(xué)技術(shù)進步獎二等獎1項、中國商業(yè)聯(lián)合會科學(xué)技術(shù)獎一等獎1項,參與獲得中國食品工業(yè)協(xié)會科學(xué)技術(shù)獎特等獎等6項。發(fā)表學(xué)術(shù)論文60
余篇,其中以第一/通訊作者發(fā)表論文48篇;獲發(fā)明專利授權(quán)15件,其中以第一發(fā)明人授權(quán)7件;參與制定國家標(biāo)準(zhǔn)和團體標(biāo)準(zhǔn)2項;參編教材和專著3部。
第一章 實驗室與實驗的一般準(zhǔn)則
第一節(jié) 實驗室一般準(zhǔn)則
一、 實驗室準(zhǔn)則要點
二、 實驗室基本設(shè)施安全使用準(zhǔn)則
三、 實驗室危險化學(xué)品使用準(zhǔn)則
四、 實驗室生物安全防護
五、 實驗室環(huán)保準(zhǔn)則
第二節(jié) 實驗開展的一般準(zhǔn)則
一、 實驗方案確定準(zhǔn)則
二、 實驗內(nèi)容確定準(zhǔn)則
三、 實驗設(shè)計準(zhǔn)則及方法
第三節(jié) 實驗數(shù)據(jù)分析與報告撰寫
一、 實驗數(shù)據(jù)分析及方法
二、 實驗報告撰寫規(guī)范
第四節(jié) 實驗資料及其檢索方法
一、 實驗室常用工具書
二、 生命科學(xué)與生物工程領(lǐng)域主要期刊
三、 生命科學(xué)與生物工程重要文獻資源
四、 文獻及網(wǎng)絡(luò)信息檢索方法
第五節(jié) 實驗室道德規(guī)范
第二章 生物工程實驗常用儀器與設(shè)備
第一節(jié) 分析檢測設(shè)備
一、 分光光度計
二、 氣相色譜儀
三、 液相色譜儀
四、 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀
五、 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀
第二節(jié) 生物制品制備相關(guān)設(shè)備
一、 發(fā)酵設(shè)備
二、 提取設(shè)備
三、 純化設(shè)備
四、 濃縮和干燥設(shè)備
第三節(jié) 現(xiàn)代生物技術(shù)設(shè)備
一、 電泳設(shè)備
二、 凝膠成像系統(tǒng)
三、 PCR儀
四、 免疫印跡
五、 酶標(biāo)儀
六、 流式細(xì)胞儀
第三章 基因工程實驗
實驗 1 PCR 擴增目的基因
實驗 2 質(zhì)粒 DNA 的提取、分離純化和酶切鑒定
實驗 3 感受態(tài)細(xì)胞的制備
實驗 4 重組質(zhì)粒的連接、轉(zhuǎn)化及篩選
實驗 5 目的基因原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建
實驗 6 外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達
實驗 7 表達蛋白的 SDS-PAGE 分析
第四章 細(xì)胞工程實驗
實驗 8 海洋微藻細(xì)胞固定化培養(yǎng)技術(shù)
實驗 9 綠色熒光蛋白的異源表達
實驗 10 紅曲霉原生質(zhì)體的制備與顯微攝影
實驗 11 釀酒酵母的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)化
實驗 12 植物 (胡蘿卜) 的組織培養(yǎng)
實驗 13 小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)
實驗 14 細(xì)胞傳代培養(yǎng)
第五章 酶工程實驗
實驗 15 產(chǎn)酶菌株的快速分離篩選--—以纖維素酶產(chǎn)生菌為例
實驗 16 糖化酶的發(fā)酵、提取與酶活力測定
實驗 17 果膠酶的發(fā)酵、提取與酶活力測定
實驗 18 利用親和層析法從雞蛋清中分離溶菌酶
實驗 19 α-淀粉酶的固定化和酶活力測定
實驗 20 紅曲霉酯酶同工酶鑒定技術(shù)
第六章 發(fā)酵工程實驗
實驗 21 發(fā)酵菌種的復(fù)壯和保藏
實驗 22 大腸桿菌生長曲線的測定
實驗 23 發(fā)酵污染--—噬菌體的檢測
實驗 24 l-乳酸發(fā)酵
實驗 25 丙酮酸發(fā)酵
實驗 26 檸檬酸發(fā)酵
實驗 27 枯草芽孢桿菌發(fā)酵
實驗 28 淀粉酶固態(tài)發(fā)酵
實驗 29 小型連續(xù)發(fā)酵
第七章 食品生物技術(shù)實驗
實驗 30 甜酒釀發(fā)酵
實驗 31 干紅葡萄酒釀造
實驗 32 醬油釀造
實驗 33 米醋釀造
實驗 34 啤酒發(fā)酵
實驗 35 特色食藥?真菌菌種生產(chǎn)
實驗 36 乳酸菌的分離純化以及凝固型酸乳發(fā)酵
實驗 37 濃香型杭白菊速溶粉制備
實驗 38 納豆制作及其抗菌性實驗
第八章 生物分離工程實驗
實驗 39 RNA 制備和核苷酸的離子交換層析分離
實驗 40 冬蟲夏草菌絲培養(yǎng)及胞內(nèi)多糖的提取
實驗 41 膜分離法精制濃縮酶
實驗 42 海帶中巖藻聚糖硫酸酯的提取
實驗 43 食用菌多糖的提取及初步純化
實驗 44 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳
實驗 45 利用鹽析和等電點沉淀法從牛乳中制備酪蛋白
實驗 46 離子交換層析分離氨基酸
實驗 47 大蒜細(xì)胞超氧化物歧化酶的提取與分離
實驗 48 雙水相體系中蛋白質(zhì)分配系數(shù)的測定
實驗 49 離子交換樹脂總交換容量的測定
第九章 綜合實驗:脂肪酶表達載體構(gòu)建、表達與純化
實驗 50 細(xì)菌基因組的提取
實驗 51 基因的 PCR 擴增及產(chǎn)物純化
實驗 52 細(xì)菌質(zhì)粒提取
實驗 53 載體質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物的雙酶切及酶切產(chǎn)物的純化
實驗 54 重組載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化
實驗 55 重組子的篩選與測序驗證
實驗 56 基因工程菌菌種的活化及擴大培養(yǎng)
實驗 57 基因工程菌發(fā)酵工藝
實驗 58 發(fā)酵過程中殘?zhí)、生物量及表達產(chǎn)物含量的測定
實驗 59 脂肪酶的表達及分離純化
實驗 60 SDS-PAGE 凝膠電泳
實驗 61 脂肪酶活力測定
第十章 綜合實驗:生物分子的生物信息分析、分子改造及發(fā)酵過程的虛擬仿真
實驗 62 目的基因的結(jié)構(gòu)鑒別、蛋白質(zhì)預(yù)測和系統(tǒng)發(fā)育分析
實驗 63 應(yīng)用拉氏圖信息提升谷氨酸脫羧酶的熱穩(wěn)定性
實驗 64 乳酸菌發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸過程優(yōu)化及放大虛擬仿真實驗
附錄一 常見元素的相對原子質(zhì)量表
附錄二 化學(xué)試劑的規(guī)格
附錄三 法定計量單位和單位換算
附錄四 生物工程單元操作實驗中的常用數(shù)據(jù)表
附錄五 常用培養(yǎng)基和緩沖液的配制方法
參考文獻