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轉(zhuǎn)錄因子復合體影響木材形成的分子機理
本書首先通過分析楊樹不同組織的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),鑒定出221個木質(zhì)部高豐度表達的轉(zhuǎn)錄因子,并逐一克隆出這些基因。利用酵母雙雜交技術(shù),分析它們與木材形成轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中核心因子PtrMYB074的互作關(guān)系,發(fā)現(xiàn)54個轉(zhuǎn)錄因子與PtrMYB074相互作用。在楊樹木質(zhì)部原生質(zhì)體中,雙分子熒光互補實驗進一步證明它們能夠在楊樹體內(nèi)互作。在此基礎(chǔ)上,本書中對54個互作蛋白中在木質(zhì)部表達量高且表達模式特異的轉(zhuǎn)錄因子PtrWRKY19,與PtrMYB074如何相互作用協(xié)同調(diào)控木材形成的分子機制進行了深入研究。首先,利用農(nóng)桿菌介導的毛果楊遺傳轉(zhuǎn)化方法創(chuàng)制PtrMYB074和PtrWRKY19的過表達植株,進行生長表型以及組織水平分析其在木材形成中的功能。然后,通過染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)合高通量測序分析,發(fā)現(xiàn)PtrMYB074與PtrWRKY19共同調(diào)控木材形成相關(guān)的靶基因,其中PtrbHLH186是這些靶基因中在木質(zhì)部高豐度表達的轉(zhuǎn)錄因子基因。其次,利用楊樹木質(zhì)部原生質(zhì)體瞬時表達系統(tǒng)和CRISPR/Cas9介導的楊樹突變體結(jié)合染色質(zhì)免疫共沉淀及凝膠電泳遷移實驗分析,證明PtrMYB074與PtrWRKY19相互作用形成異源二聚體,通過PtrWRKY19與PtrbHLH186基因啟動子上W-box的結(jié)合,將PtrMYB074招募PtrbHLH186啟動子上增強此基因表達水平。最后,發(fā)現(xiàn)了調(diào)控楊樹次生木質(zhì)部發(fā)育的“PtrMYB074-PtrWRKY19-PtrbHLH186”分子模塊,揭示了木材形成過程中轉(zhuǎn)錄因子(TF)-DNA和TF-TF相互作用的轉(zhuǎn)錄調(diào)控新機制,拓展了人們對木材形成的分子調(diào)控機制的科學認知,為利用分子育種技術(shù)進行林木材性遺傳改良提供了新線索。
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