《生物工程基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》主要介紹生物工程主要專業(yè)實(shí)驗(yàn)課程的基本操作技術(shù)與實(shí)驗(yàn)手段,包括生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、基因工程實(shí)驗(yàn)、酶與蛋白質(zhì)工程實(shí)驗(yàn)、發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)、生物分離工程實(shí)驗(yàn)等。該書(shū)將各相關(guān)實(shí)驗(yàn)與其對(duì)應(yīng)的理論課程有機(jī)結(jié)合起來(lái),形成既具有一定理論體系又具有一定通用性和指導(dǎo)性的教學(xué)實(shí)驗(yàn)用書(shū),強(qiáng)調(diào)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析與討論,引導(dǎo)學(xué)生通過(guò)查閱文獻(xiàn)資料來(lái)對(duì)比和驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果,及時(shí)反思和分析既有的實(shí)驗(yàn)方案和思路,有利于培養(yǎng)學(xué)生在實(shí)驗(yàn)中的嚴(yán)謹(jǐn)性和規(guī)范性,充分激發(fā)和培養(yǎng)學(xué)生的獨(dú)立思考能力、創(chuàng)新能力以及“存疑”和“求異”精神。
第一章 常用儀器設(shè)備及使用 001
一、PCR 儀的原理及使用方法 001
二、臺(tái)式離心機(jī)的使用 003
三、分光光度計(jì)原理及使用 005
四、自動(dòng)核酸蛋白分離色譜儀 008
五、電泳儀的使用 011
六、凝膠成像系統(tǒng)的使用 017
七、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的使用 018
八、索氏提取器 020
九、微波-超聲波合成萃取儀 021
十、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 023
十一、BT 系列蠕動(dòng)泵 025
第二章 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn) 028
實(shí)驗(yàn)一 甲醛滴定法 028
實(shí)驗(yàn)二 糖的定量:3,5-二硝基水楊酸比色法 030
實(shí)驗(yàn)三 植物組織中可溶性總糖的測(cè)定 033
實(shí)驗(yàn)四 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 035
實(shí)驗(yàn)五 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng) 037
實(shí)驗(yàn)六 肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測(cè)定 038
實(shí)驗(yàn)七 維生素C 的定量測(cè)定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 041
實(shí)驗(yàn)八 粗脂肪提取和含量測(cè)定 043
實(shí)驗(yàn)九 動(dòng)物組織中脫氧核糖核酸的制備及測(cè)定 045
第三章 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 048
實(shí)驗(yàn)一 DNA 的瓊脂糖凝膠電泳 048
實(shí)驗(yàn)二 紫外分光光度法分析DNA 濃度與純度 050
實(shí)驗(yàn)三 CTAB 法提取植物基因組DNA 052
實(shí)驗(yàn)四 SDS 法提取植物基因組 DNA 053
實(shí)驗(yàn)五 大腸桿菌基因組DNA 的提取 055
實(shí)驗(yàn)六 綠色熒光蛋白基因的PCR 擴(kuò)增 057
實(shí)驗(yàn)七 硅膠膜吸附法純化DNA 片段 060
第四章 基因工程實(shí)驗(yàn) 062
實(shí)驗(yàn)一 質(zhì)粒DNA 的提取與檢測(cè) 062
實(shí)驗(yàn)二 質(zhì)粒DNA 的酶切反應(yīng) 067
實(shí)驗(yàn)三 瓊脂糖凝膠電泳回收DNA 片段 070
實(shí)驗(yàn)四 目的DNA 片段與載體的連接反應(yīng) 072
實(shí)驗(yàn)五 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備 076
實(shí)驗(yàn)六 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化 079
實(shí)驗(yàn)七 陽(yáng)性克隆的篩選和鑒定 082
實(shí)驗(yàn)八 外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá) 085
實(shí)驗(yàn)九 SDS-PAGE 檢測(cè)表達(dá)蛋白 089
第五章 酶與蛋白質(zhì)工程實(shí)驗(yàn) 094
實(shí)驗(yàn)一 過(guò)氧化氫酶活性的測(cè)定 094
實(shí)驗(yàn)二 淀粉酶的提取和活性測(cè)定 096
實(shí)驗(yàn)三 膽綠素還原酶的修飾與活性基團(tuán)鑒定 099
實(shí)驗(yàn)四 殼聚糖微球固定化木瓜蛋白酶 100
實(shí)驗(yàn)五 溶菌酶的制備及活力測(cè)定 103
實(shí)驗(yàn)六 酶法澄清蘋(píng)果汁加工工藝優(yōu)化 105
實(shí)驗(yàn)七 酵母細(xì)胞固定化 106
實(shí)驗(yàn)八 pH 對(duì)酶活力的影響——最適pH 的測(cè)定 108
實(shí)驗(yàn)九 溫度對(duì)酶活力的影響——最適溫度的測(cè)定 110
實(shí)驗(yàn)十 酵母中蔗糖酶的提取及活性測(cè)定 112
第六章 發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn) 115
實(shí)驗(yàn)一 自然界中發(fā)酵菌株的分離 115
實(shí)驗(yàn)二 淀粉酶發(fā)酵菌種的初篩 117
實(shí)驗(yàn)三 液化型淀粉酶活力的測(cè)定 118
實(shí)驗(yàn)四 液化型淀粉酶發(fā)酵菌種的紫外誘變育種 121
實(shí)驗(yàn)五 發(fā)酵菌種的復(fù)壯和保藏 122
實(shí)驗(yàn)六 正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化生產(chǎn)菌株發(fā)酵培養(yǎng)基的配方 124
實(shí)驗(yàn)七 生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)物形成曲線的測(cè)定 126
第七章 生物分離工程實(shí)驗(yàn) 129
實(shí)驗(yàn)一 牛乳中酪蛋白的提取及含量測(cè)定 129
實(shí)驗(yàn)二 維生素A 的提取及含量測(cè)定 132
實(shí)驗(yàn)三 大蒜細(xì)胞SOD 酶的提取與分離 136
實(shí)驗(yàn)四 香菇多糖的提取、純化及含量測(cè)定 141
實(shí)驗(yàn)五 離子交換樹(shù)脂總交換容量的測(cè)定 143
實(shí)驗(yàn)六 離子交換柱色譜分離混合氨基酸 148
實(shí)驗(yàn)七 PEG/硫酸鹽雙水相系統(tǒng)相圖制作 152
實(shí)驗(yàn)八 PEG/(NH4)2SO4 系統(tǒng)中蛋白質(zhì)分配系數(shù)測(cè)定 154
實(shí)驗(yàn)九 胰蛋白酶的提取與激活 158
實(shí)驗(yàn)十 胰蛋白酶的酶活和比活測(cè)定 161
實(shí)驗(yàn)十一 反膠束萃取技術(shù)提取胰蛋白酶 164
附錄一 常用堿基符號(hào) 168
附錄二 常用氨基酸符號(hào) 169
附錄三 常用緩沖液的配制 170
附錄四 常用上樣緩沖液配制 173
附錄五 常用電泳緩沖液的配制 174
附錄六 常用試劑的配制 175
附錄七 常用緩沖液母液或儲(chǔ)存液 178
附錄八 常用抗生素 179
附錄九 硫酸銨飽和度計(jì)算及加入方式 180
參考文獻(xiàn) 182